La MISEV es el principal conjunto de directrices internacionales para estudios de vesículas extracelulares , con recomendaciones sobre nomenclatura, recolección, separación, caracterización, controles experimentales y presentación de los resultados.
La sigla significa Minimal Information for Studies of Extracellular Vesicles . Las directrices fueron desarrolladas por la International Society for Extracellular Vesicles (ISEV) para aumentar el rigor, la transparencia y la reproducibilidad de las investigaciones con vesículas extracelulares, también llamadas EVs.
La versión vigente es la MISEV2023 , publicada en febrero de 2024 en el Journal of Extracellular Vesicles . El documento reunió contribuciones de más de 1.000 investigadores de 52 países y puede consultarse mediante el DOI 10.1002/jev2.12404 .
La MISEV no establece un protocolo único. Orienta sobre cómo elegir, controlar, documentar y comunicar los métodos utilizados para que las conclusiones estén respaldadas por las evidencias.
¿Para qué sirve la MISEV?
Los estudios con EVs utilizan diferentes fuentes biológicas y técnicas de separación y análisis de vesículas extracelulares . Además, proteínas solubles, lipoproteínas, agregados y otras partículas pueden acompañar a las vesículas durante el procesamiento.
Sin una descripción adecuada de los métodos, resulta difícil comparar resultados o determinar qué componentes estaban presentes.
La MISEV ayuda a definir la terminología, identificar variables preanalíticas, seleccionar métodos compatibles con el objetivo, combinar técnicas de caracterización y planificar controles funcionales.
¿Cómo evolucionaron las directrices MISEV?
| Versión | Principal contribución |
|---|---|
| MISEV2014 | Estableció los primeros requisitos experimentales para definir EVs e investigar sus funciones. |
| MISEV2018 | Amplió las recomendaciones y reforzó el uso del término genérico «vesícula extracelular». |
| MISEV2023 | Actualizó las prácticas de producción, separación y caracterización e incluyó orientaciones sobre captación y estudios in vivo. |
Nomenclatura recomendada por la MISEV
Una de las recomendaciones centrales es utilizar «vesícula extracelular» o «EV» como término genérico cuando no se haya comprobado el origen de la partícula. Términos como « exosoma » y « microvesícula » indican vías de biogénesis específicas y no deben definirse únicamente por el tamaño, el método de separación o la presencia de marcadores como CD9 , CD63 y CD81 .
Cuando sea necesario, el término EV puede acompañarse de calificadores operativos, como:
- EVs pequeñas,
- EVs grandes,
- EVs CD63+,
- EVs derivadas de una célula determinada o
- EVs producidas bajo hipoxia.
Una partícula pequeña no es automáticamente un exosoma. Cuanto más específica sea la nomenclatura, más específicas deberán ser las evidencias sobre su origen.
Separación y caracterización de EVs
La MISEV no establece un método universalmente superior para separar vesículas extracelulares. La ultracentrifugación, el gradiente de densidad, la cromatografía de exclusión por tamaño, la ultrafiltración, la precipitación y la inmunocaptura presentan diferentes relaciones entre recuperación, especificidad, tiempo y compatibilidad con los análisis posteriores.
El método debe elegirse de acuerdo con la muestra y el objetivo. Los rotores, tiempos, temperaturas, columnas, membranas, volúmenes y fracciones recolectadas deben describirse con precisión.
La caracterización debe combinar técnicas complementarias. El análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA), por ejemplo, estima el tamaño y la concentración dentro de su rango de detección, pero por sí solo no demuestra que todas las partículas sean EVs. La microscopía proporciona información morfológica, mientras que el Western blot, los ensayos inmunoquímicos y las técnicas ómicas evalúan componentes asociados con la preparación.
También es necesario investigar contaminantes esperados, como proteínas solubles, lipoproteínas, residuos celulares y partículas extracelulares no vesiculares.
Controles para estudios funcionales
Observar un efecto después de aplicar una preparación enriquecida en EVs no demuestra que las vesículas hayan sido las responsables. Las proteínas, citocinas, reactivos o partículas no vesiculares también pueden provocar la respuesta.
La MISEV recomienda comparar la preparación de EVs con la muestra original, fracciones empobrecidas en EVs, fracciones no vesiculares y controles de los reactivos. Las curvas de dosis-respuesta y tiempo-respuesta fortalecen la interpretación. La dosis puede expresarse mediante el número de partículas, la proteína total, el volumen de origen o el número de células productoras.
¿Qué debe informarse en un estudio basado en la MISEV?
- origen y condiciones de recolección de la muestra;
- variables de procesamiento y almacenamiento;
- métodos de separación y concentración;
- parámetros de los equipos y criterios de análisis;
- técnicas complementarias de caracterización;
- evaluación de contaminantes;
- controles de los estudios funcionales;
- limitaciones del protocolo y de las conclusiones.
Los detalles experimentales también pueden registrarse en EV-TRACK , una plataforma creada para promover la transparencia metodológica en las investigaciones con EVs.
¿La MISEV es una lista de verificación obligatoria?
No. La MISEV es una guía de buenas prácticas, no una norma rígida. No todos los estudios necesitan utilizar las mismas técnicas, pero las elecciones deben estar justificadas y las limitaciones deben presentarse con claridad.
Aplicar la MISEV significa alinear la fuerza de la conclusión con la fuerza de las evidencias. El objetivo es hacer que el estudio sea más claro, comparable y reproducible, sin impedir adaptaciones ni el desarrollo de nuevos enfoques.
Conclusión
La MISEV2023 es la referencia central para los investigadores que trabajan con vesículas extracelulares. Sus recomendaciones ayudan a utilizar una nomenclatura adecuada, documentar todas las etapas, combinar técnicas de caracterización y demostrar con mayor confianza si una función o un biomarcador están realmente asociados con las EVs.
Más que declarar que un trabajo «sigue la MISEV», es importante mostrar qué recomendaciones se aplicaron y cómo los controles respaldan los resultados. Esta transparencia fortalece la calidad de los estudios y de las aplicaciones de las vesículas extracelulares.